转录因子KLF2通过调控SOCS3的转录介导JAK2/STAT3通路抑制急性髓系白血病糖酵解及恶性增殖

苏州大学附属第一医院 血液科

安竞男 赵涔竹 陈楠

215006

目的：急性髓系白血病（AML）是一种起源于白血病干细胞的恶性克隆性疾病。研究发现转录因子KLF2异常低表达于AML患者骨髓标本且与病人预后显著正相关，但其作用机制尚未明确。

方法：基于本院AML病人临床病例样本并结合临床数据库，运用蛋白免疫印迹技术和荧光定量PCR实验等技术分析临床AML患者样本及大量细胞系中KLF2的表达情况；通过体外实验发现KLF2对AML细胞的增殖及克隆形成能力的影响；将过表达组及对照组细胞通过尾静脉接种到NSG小鼠，构建AML小鼠模型，观察实验组及对照组小鼠的疾病发病情况，记录生存时间，小鼠发病时将小鼠处死后对其体重及肝脾进行称重，对实验组及对照组剥除的小鼠肝脾组织进行拍照；利用流式细胞术检测发病小鼠肝、脾组织及骨髓中的GFP百分率；HE 染色切片观察实验组及对照组小鼠肝、脾及骨髓组织的浸润情况；运用RNA-seq技术对KLF2过表达组与对照组进行了转录组测序，运用统计学软件，将差异基因进行KEGG功能和通路富集分析，预测KLF2在AML中作用及机制；利用PROMO数据库获取编码SOCS3基因上游启动子序列，通过荧光素酶报告基因实验等技术验证KLF2是否转录激活SOCS3的表达；结合临床数据库及本院收集到的AML病人标本分析临床AML患者样本中SOCS3表达；运用蛋白免疫印迹技术和荧光定量PCR实验等技术分析AML病人中KLF2与SOCS3表达的相关性；将KLF2过表达组及对照组细胞进样品经干冰运输至深圳华大基因股份有限公司进行非靶向代谢组学测序；应用ATP检测试剂盒、葡萄糖及乳酸检测试剂盒检测KLF2表达的变化对AML细胞ATP含量、葡萄糖摄取及乳酸生成的影响；应用qPCR和Western blot法检测KLF2表达的变化对糖酵解相关基因及关键蛋白的影响；应用Seahorse实验检测KLF2表达的变化对细胞外酸化率（ECAR）的影响；通过qPCR和Western blot检测KLF2过表达对糖酵解相关分子表达的影响。

结果：转录因子KLF2通过调控能量代谢重编程关键通路影响AML发生发展的疾病过程，并可能成为潜在的预后标志物和治疗靶点。

讨论：本研究拟通过检测转录因子KLF2在AML患者肿瘤组织中的表达水平，着手研究转录因子KLF2对AML细胞代谢重编程等生物学行为的影响和下游信号通路调控网络机制，阐明转录因子KLF2在AML发生发展中的作用和具体机制，为临床诊疗及预后判断提供理论依据。