桑广健
天津市肿瘤医院
目的:建立板蓝根药材中腺苷和(R,S)-告依春的含量测定方法,为其提供质量标准。以板蓝根为原料的中成药制剂很多,如板蓝根颗粒剂,板蓝根注射液,板蓝根片,清开灵注射液,抗病毒口服液等等。所有的这些制剂均是以水提取板蓝根药材,采用板蓝根中的水溶性成分作为有效部位而制成。药典规定的板蓝根颗粒(1990年版~2000版)的生产工艺也是采用水煎醇沉法。由于板蓝根水提取中的成分不够明确,有效成分或指标成分不清楚,文献中考察工艺的指标均选取了其中的已知成分—靛蓝和靛玉红,这种指标的不正确选择,不但不能有效的优化工艺,反而会导出一个错误的判断。张建军等[24]用双波长薄层扫描法测定了板蓝根及水煮物、水煮物残渣、95%乙醇提取物、50%醇提物中靛蓝和靛玉红的含量,结果发现醇提法中靛蓝、靛玉红含量很高,水煮法提出的靛蓝和靛玉红含量甚少,几乎全部存在于残渣中。同样,李影等[25]也发现水煮醇层工艺中靛玉红的损失率高达92.4%。陈玉生等[26]通过50%~90%的乙醇(梯度10%)对靛玉红提取率的比较,发现70%乙醇对靛玉红的提取率较高,因而建议新工艺以70%的乙醇作溶媒。梁学政[27]的研究同样表明,原水煮醇沉工艺靛蓝、靛玉红的损失大,建议新工艺以60%乙醇进行提取较好。然而,上述的评价指标与板蓝根的抗病毒活性无关,与活性直接相关的工艺研究尚需深入开展。
方法:仪器为Waters 2695-2487,用Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μ)色谱柱,流动相为甲醇-水(10:90),检测波长为255nm,柱温为30℃,流速为1.0 ml/min。长期以来,许多学者建议以靛蓝、靛玉红作为大青叶、板蓝根及板蓝根颗粒中的活性成分及质控指标[28~31]。质控的方法有薄层扫描法[24]和高效液相色谱法[29~31]。研究发现,大青叶中靛蓝、靛玉红的含量远远高于板蓝根中的含量;板蓝根的制剂工艺中,靛蓝、靛玉红的提取率极低(<10%)在加之靛蓝、靛玉红不是板蓝根清热解毒或抗病毒的成分。因而,单独以靛蓝、靛玉红作为质控指标,不能有效的评价板蓝根及其制剂质量。
结果:板蓝根腺苷的浓度在10.12~30.36µg/ml范围内呈较好的线性关系(r=1);平均加样回收率为96.7%,RSD为1.1%。(R,S)-告依春的浓度在20.42~61.26µg/ml范围内呈较好的线性关系(r=1);平均加样回收率为104.0%,RSD为0.7%。板蓝根及其制剂的质量却很难找到一个指标性成份进行有效地控制,在这种情况下,多成份综合评价的质量控制体系较为客观实际,指纹图谱正是这种能够反映中药多种成分特点的一种质量控制技术。中药的指纹图谱是中药现代化的一个重点内容。近年来,中药的指纹图谱发展迅速。我们从2000年即开始承担“板蓝根指纹图谱研究”的课题,现在已经通过课题验收,并制定了板蓝根活性部位的指纹图谱。并认为,板蓝根中抗病毒活性成分为其中的非常见的核苷类。陈勇[37]等也研究了板蓝根的HPLC指纹图谱,其检测波长(262nm)和我们所做的活性部位的指纹图谱相似。除此之外,沈阳药科大学也在进行板蓝根注射剂的指纹图谱研究。
结论:该方法简便、而且简便易行,准确,无干扰,可用于板蓝根药材中腺苷和告依春的质量控制。