李天祺 , 顾燕子 , 秦广琪 , 井薇玮 , 柳蓓燕 , 侯琴琴 , 丁斐 , 许蜜蝶 , 孙孟红
复旦大学附属肿瘤医院
目的:生物样本库保藏的样本的质量会对后续科学研究产生重要影响,样本保藏工作步骤复杂,会存在很多的分析前变量影响样本质量,因此需要通过质量控制体系持续关注样本质量,评估不同制备方案所得样本的质量差异,从中选择更优秀的样本保藏方案,为临床科研人员高效提供优质样本。本研究利用复旦大学附属肿瘤医院生物样本库保藏在库的外周血单个核细胞(PBMC)冻存样本进行复苏和活率检测,建立外周血PBMC质量评价体系。根据提取方法的不同,评估两种外周血PBMC制备方法对细胞活率的影响。
方法:本实验选取2018至2023年冻存在库的外周血PBMC进行复苏,使用细胞计数板计数,并对细胞进行台盼蓝染色;计算两种制备方法所得细胞数量和细胞活率;并比较淋巴细胞分离液法和BD-CPT采血管法提取的外周血PBMC数量和活率的差异。
结果:实验表明,通过PBMC的复苏培养和观察,2018至2023年冻存在库的外周血PBMC活率均在85%以上,两种制备方法对细胞活率的影响无显著统计学差异,两种制备方法所得细胞数量也无显著统计学差异。相对于淋巴细胞分离液法,BD-CPT采血管法流程相对简洁,操作步骤少,与淋巴细胞分离液法相比平均单个样本可缩减约3-5分钟制备时间,每100个样本可节省处理时间约1.5小时;相对于BD-CPT采血管法,淋巴细胞分离液法人工操作步骤较多,但是试剂耗材成本低,使用淋巴细胞分离液法可降低制备成本,与BD-CPT采血管法相比,平均每个样本节约70%制备经费。
结论:通过质控体系持续关注样本质量,提高生物样本库保藏能力,高质量处理待检测样本,为临床科研提供有力支撑是生物样本库工作人员不断追求的目标。本次研究选择外周血PBMC作为质量控制的研究对象,通过针对外周血PBMC的复苏培养和观察,确定适合自身样本库外周血PBMC的质量控制流程,从而保障样本保藏质量。通过对比既往不同提取流程的样本,评估在库样本质量,发现淋巴细胞分离液法和BD-CPT采血管法可获得同等质量的外周血PBMC样本,但两种方法在性价比上存在显著差异,这为后续样本库的外周血PBMC保藏流程建立提供更多可选方案。