目的：明确白细胞介素-25对系统性红斑狼疮小鼠疾病严重程度及滤泡辅助性T细胞分化和功能的调控，进一步探究IL-25调控Tfh细胞分化和功能的分子机制。

方法：

（1）构建SLE小鼠模型，在初次免疫后的第21和35天，尾静脉注射重组IL-25蛋白，检测血清中尿素氮水平和肌酐水平，通过酶联免疫吸附试验检测血清抗双链DNA抗体水平。制备小鼠肾脏病理切片，通过苏木精-伊红染色、过碘酸-希夫染色、通过免疫荧光检测肾脏组织病理变化。利用流式细胞术检测小鼠脾脏和局部引流淋巴结中Tfh细胞、生发中心B细胞的比例和数目，同时检测脾脏、淋巴结和骨髓的浆细胞比例和数目。

（2）利用野生型和Il-25^-/-小鼠构建SLE小鼠模型，检测血清中尿素氮水平、肌酐水平和抗dsDNA抗体水平，HE染色、PAS染色和免疫荧光观察肾脏组织病理变化。FCM检测小鼠脾脏和局部引流淋巴结中Tfh细胞、GC B细胞的比例和数目，同时检测脾脏、淋巴结和骨髓的浆细胞比例和数目。

（3）利用WT和Il-25^-/-小鼠构建SLE小鼠模型，在初次免疫的第50天，磁珠分选CD45.1小鼠脾脏中的naïve CD4⁺T细胞，经尾静脉过继转移至上述SLE小鼠模型中，分别为WT-SLE组和Il-25^-/--SLE组。在过继转移后的第5天，FCM检测不同组别小鼠脾脏和局部引流淋巴结中CD45.1⁺Tfh细胞、CD45.1⁺IL-21⁺Tfh细胞、CD45.1⁺ICOS⁺Tfh细胞和CD45.1⁺CD40L⁺Tfh细胞比例。制备小鼠引流淋巴结切片，免疫荧光观察T细胞归巢情况，计算归巢指数。

（4）利用CD45.1小鼠构建SLE模型，在初次免疫的50天，磁珠分选WT小鼠和Il-17rb^-/-小鼠脾脏中的naïve CD4⁺T细胞，经尾静脉过继转移至CD45.1-SLE小鼠模型中。在过继转移后的第5天，FCM检测CD45.2⁺Tfh细胞和CD45.2⁺IL-21⁺Tfh细胞、CD45.2⁺ICOS⁺Tfh细胞和CD45.2⁺CD40L⁺Tfh细胞比例。

（5）建立体外Tfh细胞诱导体系，加入重组IL-25蛋白，实时荧光定量PCR检测腺病毒E4启动子结合蛋白4的mRNA水平变化，蛋白免疫印迹和FCM检测E4BP4蛋白水平的变化。FCM检测上述（4）中不同组别小鼠脾脏和局部引流淋巴结中CD45.2⁺CD4⁺细胞中E4BP4的表达。

结果：

（1）与SLE小鼠相比，注射IL-25后的SLE小鼠脾脏和淋巴结肿胀程度缓解，蛋白尿指数降低，血清中肌酐、尿素氮和抗dsDNA抗体的水平也有所降低。病理结果显示：注射IL-25后的SLE小鼠肾小球内炎症细胞增生减少，肾小球系膜组织增生减少。此外，免疫荧光结果发现，注射IL-25后的SLE小鼠肾小球中lgG沉积明显减少。FCM结果发现：与SLE小鼠相比，注射IL-25后的SLE小鼠脾脏和局部引流淋巴结中Tfh细胞和GC B细胞的比例降低和数目减少，脾脏、淋巴结和骨髓中的浆细胞比例和数目同样减少。

（2）与野生型SLE小鼠相比，Il-25^-/--SLE小鼠脾脏和淋巴结体积增大，蛋白尿指数升高，血清中肌酐、尿素氮和抗dsDNA抗体的水平也有所增高。HE染色结果发现：Il-25^-/--SLE小鼠肾小球内炎症细胞浸润增多，肾小球基质被破坏严重；PAS染色结果显示：Il-25^-/--SLE小鼠肾小球基质的弥漫性扩张，系膜细胞增多。此外，免疫荧光结果显示，Il-25^-/--SLE小鼠肾小球中lgG沉积增多。FCM结果显示：Il-25^-/--SLE小鼠体内Tfh细胞和GC B细胞比例和数目升高，脾脏、淋巴结和骨髓中的浆细胞比例和数目同样升高。

（3）与WT-SLE组小鼠相比，Il-25^-/--SLE组小鼠脾脏和淋巴结中的CD45.1⁺Tfh细胞、CD45.1⁺IL-21⁺Tfh细胞、CD45.1⁺ICOS⁺Tfh细胞和CD45.1⁺CD40L⁺Tfh细胞比例增多，且CD45.1⁺CD4⁺细胞的归巢指数升高。

（4）在CD45.1-SLE小鼠的脾脏和淋巴结中，与CD45.2⁺Tfh细胞相比，Il-17rb^-/-的CD45.2⁺Tfh细胞比例增多，CD45.2⁺IL-21⁺Tfh细胞、CD45.2⁺ICOS⁺Tfh细胞和CD45.2⁺CD40L⁺Tfh细胞比例同样增多。

（5）在Tfh细胞诱导体系下，加入IL-25重组蛋白后，CD4+T细胞中E4BP4的mRNA及蛋白水平升高。在CD45.1-SLE小鼠的脾脏和淋巴结中，Il-17rb^-/-的CD45.2⁺CD4⁺细胞中E4BP4表达明显减少。

结论：

（1）IL-25缓解SLE小鼠疾病严重程度。

（2）IL-25抑制SLE小鼠Tfh细胞的分化和功能。

（3）IL-25通过E4BP4抑制Tfh细胞分化和功能。